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1、农杆菌转化籼稻技术体系的优化
    为了提高农杆菌转化籼稻的频率,对农杆菌转化籼稻愈伤组织受体的技术进行了改进,结果表明:籼稻幼穗愈伤组织是转化的最佳受体;在农杆菌侵染之前先用粒子轰击可以有效地提高农杆菌转化籼稻愈伤组织的频率,其中以每个样品轰击两次的效果最好,其转化频率可比对照提高57.5%;在农杆菌侵染愈伤组织过程中,通过负压处理可明显提高转化频率;在农杆菌侵染后,用20mmol/L浓度的氯化钙溶液处理籼稻愈伤组织,并同时在处理液中添加0.1% Tween20,可明显促进愈伤组织转化和再生。并且愈伤组织的转化频率以及抗性植株再生频率均有明显提高。
转基因水稻T1代植株抗虫大田实验
2、转基因籼稻抗虫抗病性鉴定与遗传稳定性分析
    对分别导入了Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、雪花莲凝集素基因、几丁质酶基因如β-1,3-葡聚糖酶基因的培矮64s、特青、559、E32、288、198、1125等籼型杂交稻亲本材料的152个株系进行了抗虫、抗病性鉴定和农艺性状的分析,通过离体叶片饲虫法、单株接虫法和大田自然虫害调查法分别对二化螟、纵卷叶螟和稻飞虱等虫害进行鉴定,得到了不少抗虫性较好的植株,同时,还对抗虫检测方法进行了优化。通过人工接种法和自然发病法分别对稻瘟病和纹枯病进行了鉴定,筛选出了个别抗稻瘟病的单株。另外,通过对转基因水稻各种农艺性状的分析,发现大部分转基因材料在育性、株高、株型和生育期等性状上都出现了变异,并从中筛选出了个别农艺性状表现较好的株系。

叶螟6天后的接稻纵卷E32叶片(左:对照叶片;右:转基因叶片)

HSP70 sense cDNA、HSP70 antisense cDNA连接产物转化结果

A:未用任何DNA转化的空白感受态,平皿中加Amp
B:未用任何DNA转化的空白感受态,平皿中未加Amp
C:HSP70 antisense cDNA连接产物

烟草转基因植株叶片与对照叶片GUS显色结果

左:对照叶片
右:转基因植株叶片

烟草花药石蜡切片
左:对照株(花粉可育)右:转化株(花粉不育)

9311愈伤组织在含basta30mg/L筛选培养基上的抗性愈伤组织(左)

抗性愈伤组织在分化培养基上的分化情况(右)
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